c-IAP2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400762-ACT

O BIRC3 humano codifica a c-IAP2, uma ligase E3 de ubiquitina com domínio RING que regula a apoptose e a sinalização inflamatória ao ubiquitinar componentes-chave dos complexos do receptor de TNF e ao modular a ativação de caspases. A c-IAP2 participa do controle da via de NF-κB, incluindo a comunicação cruzada entre a sinalização canônica e não canônica de NF-κB por meio da regulação da estabilidade de NIK e de mecanismos de “checkpoint” dependentes de ubiquitina na sinalização proximal ao receptor. Por essas funções, o BIRC3 influencia a sobrevivência celular, respostas induzidas por citocinas e a adaptação ao estresse em contextos imunes e epiteliais. A desregulação da expressão ou atividade de BIRC3 tem sido associada a limiares apoptóticos alterados e a sinalização aberrante de NF-κB observada em múltiplos modelos relevantes de doença, apoiando seu uso como um nó mecanístico em pesquisas sobre morte celular e inflamação.

c-IAP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BIRC3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

c-IAP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BIRC3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BIRC3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de c-IAP2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BIRC3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de c-IAP2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via c-IAP2 em células tumorais com expressão de BIRC3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.