Date published: 2026-7-15
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The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
Cas9n Nickase gRNA Plasmid Targeting: Dual gRNA plasmids create single-strand nicks at precise DNA sequences for efficient genome editing using Cas9n Nickase.
Cas9n Nickase gRNA Plasmid Targeting: Dual gRNA plasmids create single-strand nicks at precise DNA sequences for efficient genome editing using Cas9n Nickase.
This image illustrates the Cas9n Nickase mechanism used for precise genome editing. Two plasmids (Plasmid 1 and Plasmid 2) are shown, each containing a targeted DNA sequence. The system utilizes single-guide RNAs (sgRNA) to direct Cas9n Nickase to specific genomic locations, represented by the blue and pink DNA strands. The sgRNA scaffold aids in guiding Cas9n to the 20 nucleotide (nt) target sequence on the DNA. Cas9n makes single-strand cuts at NCC and NGG sites, enabling precise gene modifications without creating double-strand breaks.
This image illustrates the Cas9n Nickase mechanism used for precise genome editing. Two plasmids (Plasmid 1 and Plasmid 2) are shown, each containing a targeted DNA sequence. The system utilizes single-guide RNAs (sgRNA) to direct Cas9n Nickase to specific genomic locations, represented by the blue and pink DNA strands. The sgRNA scaffold aids in guiding Cas9n to the 20 nucleotide (nt) target sequence on the DNA. Cas9n makes single-strand cuts at NCC and NGG sites, enabling precise gene modifications without creating double-strand breaks.
The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.

Btk 더블 틈내기효소 플라스미드 (h): sc-400603-NIC

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데이터 시트
  • Target species: human
  • 20 µg of transfection-ready, purified plasmid DNA; Suitable for up to 20 transfections
  • Btk Double Nickase Plasmid (h) 는 한쌍의D10A mutated Cas9 nuclease 와 타깃특정 20 nt guide RNA (gRNA)를 인코딩하는 plasmid를 포함하고있으며 gRNA는 대응 CRISPR/Cas9 KO보다 높은 특이성을 띤 knockout gene을 발현하도록 디자인되였습니다.
  • 한쌍의 gRNA는 약 20bp가량 떨어져 있으며 이는 게놈DNA의 Cas9-mediated double nicking을 발생하여 DSB를 모방합니다.
  • 한쌍의 plasmid 중 하나는 selection에 필요한 puromycin-resistance gene을, 다른하나는 형질주입효율을 확인하는 GFP marker를 보유하고있습니다.
  • Btk 더블 니케이스 플라스미드 (h) 및 Btk 더블 니케이스 플라스미드 (h2)는 BTK을 표적하는 서로 다른 쌍을 이루는 gRNA 설계를 암호화합니다. 하나 또는 두 가지 디자인 모두 이용 가능할 수 있습니다
  • Transfection, gene knockout효율은 WB, IF나 IHC등 방법으로 측정할수있습니다, 권장하는 항체는 Btk Antibody (E-9): sc-28387
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    Btk 더블 틈내기효소 플라스미드 (h)

    sc-400603-NIC
    20 µg
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    Btk 더블 틈내기효소 플라스미드 (h2)

    sc-400603-NIC-2
    20 µg
    		$410.00

    브루톤 티로신 키나아제(BTK; Btk)는 비수용체형 Tec 계열 키나아제로, B세포 수용체(BCR) 및 여러 면역수용체 하위에서 신호를 전달하며 활성화 입력을 포스포리파아제 Cγ2(PLCγ2), 칼슘 유입, MAPK, PI3K–AKT, NF-κB 신호전달과 연결한다. 인간 조혈계 세포에서 BTK는 B세포 발달, 항원에 의해 유도되는 활성화, 사이토카인 생성, 그리고 골수계 계통에서의 선천면역 수용체 반응을 조율하는 데 기여한다. 조절 이상이 발생한 BTK 신호는 면역 기능 장애와 연관되며, 여러 B세포 악성종양에서 병원성 생존 및 활성화 프로그램에 기여하기 때문에 림프구 신호전달의 기전 연구에서 널리 활용되는 표적 노드이다. 또한 BTK는 세포 부착과 이동을 조절하는 경로와도 연결되어 있어, 면역세포 이동(트래피킹)과 미세환경 상호작용 연구를 뒷받침한다.

    Btk 더블 니카제 플라스미드(h)는 human 세포주 내 BTK 유전자좌의 고특이성 편집을 위해 설계된 쌍을 이루는 플라스미드로 구성됩니다. 각 플라스미드는 Cas9 D10A 니카아제와 BTK 내의 반대 DNA 가닥을 표적으로 하는 고유한 sgRNA를 발현합니다. 반대 DNA 가닥의 인접 부위로 유도될 때, 두 니카아제는 서로 어긋난 단일 가닥 절단 부위를 생성하며, 이는 함께 엇갈린 이중 가닥 절단을 유발하여 두 가이드의 조화된 표적 활성을 필요로 합니다. 이렇게 생성된 DNA 절단은 내인성 세포 복구 경로, 특히 비동형 말단 결합(NHEJ)을 통해 해결되며, 이는 BTK의 기능을 방해하는 삽입 또는 결실을 초래한다. 표적 부위에서 이중 sgRNA 결합을 요구함으로써, 이중 니킹 접근법은 편집 특이성을 향상시키고 표적 정밀도에 대한 추가적인 제어가 필요한 응용을 위한 보완적인 CRISPR 전략을 제공한다.

    편집된 세포를 효율적으로 식별할 수 있도록, 한 플라스미드는 형광 시각화를 위한 GFP를 발현하며, 다른 플라스미드는 항생제 선별을 위한 푸로마이신 내성 유전자를 포함하고 있습니다. 이러한 기능들은 공동 형질 도입된 세포 집단의 효율적인 농축을 지원하며, BTK 기능이 손상된 클론의 검증을 단순화합니다.

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