BTC Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401927-ACT

Il gene umano **BTC** codifica la betacellulina, un ligando della famiglia del fattore di crescita epidermico (EGF) che viene sintetizzato come precursore ancorato alla membrana e rilasciato tramite “shedding” proteolitico per trasmettere segnali in contesti autocrini e paracrini. BTC attiva i recettori **EGFR/ERBB**, innescando a valle le vie di segnalazione **MAPK/ERK** e **PI3K/AKT**, e modulando proliferazione, sopravvivenza e migrazione cellulare, nonché le interazioni epitelio–mesenchimali. La sua espressione è regolata durante il rimodellamento tissutale e la segnalazione infiammatoria, ed è stata associata ad alterazioni dei circuiti dei fattori di crescita nella biologia del cancro e in contesti cardiometabolici ed endocrini, inclusa la funzione delle isole pancreatiche. In quanto fattore di crescita secreto/ancorato alla membrana, BTC è spesso utilizzato per studiare la dinamica recettore–ligando, i programmi trascrizionali e il crosstalk tra vie di segnalazione che influenzano le transizioni di stato cellulare.

BTC Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di BTC senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BTC Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus BTC nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione BTC, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BTC. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus BTC nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BTC nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BTC nelle cellule tumorali con espressione di BTC silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.