BTBD4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-428253

概要

Zbtb46はBTBD4タンパク質をコードしており、BTB/POZドメインを有する因子として、マウス組織における細胞アイデンティティや分化状態を形作る転写制御プログラムに関与すると考えられています。免疫学の分野では、Zbtb46の発現は古典的樹状細胞系譜のマーカーとして広く用いられ、その制御活性は抗原提示、炎症性シグナル伝達、恒常性維持の免疫監視といった文脈で研究されています。Zbtb46に関連する遺伝子ネットワークの変化は、腫瘍関連免疫や炎症性疾患のモデルで検討されており、樹状細胞機能の変動がサイトカインプロファイルやT細胞プライミングに影響し得ることが示されています。そのため、Zbtb46/BTBD4を攪乱することは、分化、自然免疫経路、ならびに微小環境応答をつなぐ転写回路を解明するための有用なアプローチとなります。

BTBD4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるZbtb46遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Zbtb46内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Zbtb46のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、BTBD4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、BTBD4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Zbtb46欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• BTBD4の機能に不可欠なZbtb46エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Zbtb46ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• BTBD4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびBTBD4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Zbtb46遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  BTBD4 HDRプラスミド（m）および BTBD4 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはZbtb46ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のZbtb46標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。