BTBD12 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404395-ACT

SLX4 (BTBD12) codifica uma proteína de andaime multifuncional que coordena endonucleases específicas de estrutura durante o reparo de ligações cruzadas intercadeias no DNA e a resolução de intermediários de replicação bloqueados. Ela integra atividades de sinalização e enzimáticas nas vias de anemia de Fanconi e de recombinação homóloga, sustentando a estabilidade do genoma durante a fase S e a recuperação do estresse replicativo. A BTBD12 interage com complexos de nucleases como XPF–ERCC1, MUS81–EME1 e SLX1 para promover incisões apropriadas no DNA e o processamento de junções de Holliday. A perturbação ou desregulação das redes de reparo ligadas a SLX4 está associada a fenótipos de instabilidade cromossômica e a defeitos na resposta a danos no DNA relevantes para o câncer, tornando-a um nó útil para o estudo de vias de estresse genotóxico.

BTBD12 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLX4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BTBD12 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLX4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLX4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BTBD12. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLX4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BTBD12 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BTBD12 em células tumorais com expressão de SLX4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.