BSEP CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400742-ACT

ABCB11は、ヒト胆汁酸排出ポンプ（BSEP）をコードする遺伝子である。BSEPはATP結合カセット（ABC）トランスポーターで、肝細胞の胆管側膜（毛細胆管膜）に局在し、ATP依存的に胆汁酸を胆汁中へ排出する。こうした輸送活性は胆汁酸恒常性と腸肝循環の中核をなし、肝臓における脂質代謝や解毒過程にも影響を及ぼす。ABCB11の機能は、胆汁酸を感知する経路とも統合されており、胆汁酸の合成と輸送を協調的に制御するFXR制御下の転写ネットワークなどが含まれる。BSEP活性の異常または低下は、細胞内胆汁酸の蓄積によって引き起こされる胆汁うっ滞表現型や肝細胞ストレスと関連するため、ABCB11は胆汁形成や胆汁酸介在性シグナル伝達の研究における重要な標的となっている。

BSEP CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ABCB11の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BSEP CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ABCB11 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はABCB11転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BSEPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のABCB11遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBSEP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびABCB11発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBSEP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。