Brn-3c/BRN3C/POU4F3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401701-ACT

POU4F3 (Brn-3c/BRN3C) é um fator de transcrição com domínio POU que regula programas de expressão gênica necessários para a diferenciação e a manutenção de células sensoriais, com funções bem caracterizadas no desenvolvimento das células ciliadas do ouvido interno e na especificação de linhagens neuronais. Ao se ligar a motivos de DNA do tipo octâmero, o BRN3C coordena redes transcricionais que se cruzam com a sinalização do desenvolvimento e com o controle da identidade celular mediado pela cromatina. Alterações na atividade ou na expressão de POU4F3 têm sido associadas à perda auditiva hereditária e são frequentemente estudadas no contexto da sobrevivência das células ciliadas, de respostas ao estresse e de degeneração. Essas propriedades tornam o POU4F3 um marcador útil e um nó mecanístico para dissecar a regulação transcricional na neurobiologia sensorial.

Brn-3c/BRN3C/POU4F3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de POU4F3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Brn-3c/BRN3C/POU4F3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus POU4F3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição POU4F3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Brn-3c/BRN3C/POU4F3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus POU4F3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Brn-3c/BRN3C/POU4F3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Brn-3c/BRN3C/POU4F3 em células tumorais com expressão de POU4F3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.