Brn-2/BRN2/POU3F2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400392-ACT

POU3F2 (BRN2/Brn-2) é um fator de transcrição com domínio POU-homeobox que se liga a motivos octâmeros para controlar programas gênicos que governam o comprometimento com a linhagem neural, a diferenciação neuronal e a manutenção da identidade celular. No sistema nervoso em desenvolvimento e no adulto, o BRN2 coordena redes transcricionais com outros reguladores neurogênicos para modular o estado da cromatina e promover a expressão, dependente do contexto, de marcadores neuronais. A atividade desregulada de POU3F2 tem sido associada a estados de diferenciação alterados e à plasticidade de linhagem no câncer e a fenótipos do neurodesenvolvimento, tornando-o um nó útil para estudar o controle transcricional do destino celular. Seus efeitos a jusante se cruzam com vias envolvidas em “stemness”, migração e reprogramação transcricional adaptativa ao estresse.

Brn-2/BRN2/POU3F2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de POU3F2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Brn-2/BRN2/POU3F2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus POU3F2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição POU3F2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Brn-2/BRN2/POU3F2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus POU3F2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Brn-2/BRN2/POU3F2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Brn-2/BRN2/POU3F2 em células tumorais com expressão de POU3F2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.