Brk Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401127-NIC

PTK6 codifica a tirosina quinase não receptora Brk, uma enzima de sinalização relacionada à família Src que modula o controle dependente de fosforilação da proliferação, da diferenciação e da sobrevivência de células epiteliais. A Brk integra sinais provenientes de receptores tirosina quinase e de adaptadores intracelulares para influenciar vias como a sinalização da família EGFR/HER, PI3K–AKT e MAPK/ERK, com efeitos a jusante sobre a dinâmica do citoesqueleto e a motilidade celular. Em tecidos humanos, a expressão e a atividade de PTK6 são frequentemente estudadas em contextos de biologia epitelial e de sinalização oncogênica, nos quais redes de fosforilação dependentes de Brk alteradas têm sido associadas a mudanças na responsividade a fatores de crescimento e a fenótipos invasivos. Essas características tornam PTK6 um alvo útil para dissecar circuitos de sinalização dirigidos por quinases e o remodelamento de vias fosfoproteômicas em modelos relevantes para doenças.

Brk O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus PTK6 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de PTK6. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função PTK6. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com PTK6 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.