brevican Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402668-ACT

O BCAN codifica a brevicana, um proteoglicano de sulfato de condroitina enriquecido na matriz extracelular do cérebro e nas redes perineuronais, onde modula as interações célula–matriz e a plasticidade estrutural das sinapses. A brevicana liga-se ao hialuronano e associa-se à tenascina-R e a outros constituintes da matriz para influenciar a montagem da matriz extracelular, a adesão neuronal e o crescimento de neuritos. Por meio da regulação da organização da matriz pericelular e de remodelamento sensível a proteases, o BCAN contribui para processos ligados ao neurodesenvolvimento e ao refinamento de circuitos dependente da atividade. Alterações na expressão e no processamento da brevicana têm sido relatadas em contextos neurológicos e neuropsiquiátricos e, com frequência, ela é avaliada como um fator associado à matriz na biologia de gliomas e em fenótipos invasivos.

brevican O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BCAN sem alterar a sequência de ADN subjacente.

brevican O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BCAN em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BCAN, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de brevican. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BCAN nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de brevican no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via brevican em células tumorais com expressão de BCAN silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.