BRD2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402584-ACT

BRD2 (proteína 2 contendo bromodomínio) é uma proteína leitora de cromatina da família BET que se liga a lisinas acetiladas nas caudas de histonas por meio de bromodomínios em tandem, coordenando a iniciação e o alongamento da transcrição. Ao acoplar a atividade de promotores e enhancers ao recrutamento de complexos regulatórios da transcrição, a BRD2 ajuda a controlar a progressão do ciclo celular, as respostas a danos no DNA e programas de expressão gênica específicos de linhagem. A regulação da cromatina dependente de BRD2 se intersecta com redes transcricionais oncogênicas e vias de sinalização inflamatória, tornando-a um alvo amplamente estudado no controle epigenético da proliferação e da transcrição adaptativa ao estresse. A atividade desregulada de proteínas BET, incluindo função alterada de BRD2, tem sido associada à expressão aberrante de genes de crescimento e de resposta imune em múltiplos contextos relevantes para doenças.

BRD2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BRD2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BRD2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BRD2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BRD2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BRD2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BRD2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BRD2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BRD2 em células tumorais com expressão de BRD2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.