BRD1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-406252-NIC

BRD1（bromodomain containing 1）は、ブロモドメインを介してアセチル化ヒストンを認識し、転写のエピジェネティック制御に寄与するクロマチン関連タンパク質をコードします。BRD1は、ヒストンアセチル化やクロマチンリモデリングに関与する核内複合体で機能し、神経発生、細胞アイデンティティ、刺激応答性の転写に関わる遺伝子発現プログラムに影響を与えます。BRD1の制御異常は、神経精神疾患の遺伝学的背景や、クロマチン介在性の転写経路のより広範な破綻という観点から研究されてきました。これらの特性により、BRD1は、ヒストンアセチル化のシグナルがヒト細胞においてどのように転写出力へと変換されるのかを解明するうえで有用な標的となります。

BRD1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における BRD1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、BRD1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、BRD1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、BRD1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。