bradykinin B2 R CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401771-ACT

BDKRB2 kodiert den humanen Bradykinin‑B2‑Rezeptor (Bradykinin B2 R), einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der Kinine bindet und so den Gefäßtonus, die endotheliale Permeabilität, die Nozizeption sowie inflammatorische Signalwege reguliert. Die Rezeptoraktivierung koppelt überwiegend an Gq/11‑ und Gi‑abhängige Signalwege und stimuliert dadurch die Phospholipase C, die Mobilisierung von intrazellulärem Ca2+, die Produktion von Stickstoffmonoxid sowie nachgeschaltete MAPK/ERK‑ und PI3K‑Signalgebung, was schnelle zelluläre Antworten auf Gewebeschädigung prägt. Die BDKRB2‑vermittelte Signalübertragung überschneidet sich mit der Aktivität des Kallikrein‑Kinin‑Systems und steht im Cross‑Talk mit Prostaglandin‑ sowie Renin‑Angiotensin‑Signalwegen, wodurch die vaskuläre und entzündliche Homöostase beeinflusst wird. Eine fehlregulierte B2‑Rezeptoraktivität wurde mit kardiovaskulären und entzündlichen Phänotypen, Schmerzsignalgebung und ödemassoziierten Prozessen in Verbindung gebracht und unterstützt mechanistische Studien in Endothelzellen, glatter Muskulatur und immunrelevanten Modellsystemen.

bradykinin B2 R Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen BDKRB2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

bradykinin B2 R Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des BDKRB2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der BDKRB2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen bradykinin B2 R-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native BDKRB2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von bradykinin B2 R-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des bradykinin B2 R-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem BDKRB2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.