bradykinin B2 R Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401771-ACT

BDKRB2 codifica o receptor humano de bradicinina B2 (bradykinin B2 R), um receptor acoplado à proteína G que se liga a cininas para regular o tónus vascular, a permeabilidade endotelial, a nociceção e a sinalização inflamatória. A ativação do receptor envolve principalmente vias ligadas a Gq/11 e Gi para estimular a fosfolipase C, a mobilização de Ca2+ intracelular, a produção de óxido nítrico e a sinalização a jusante de MAPK/ERK e PI3K, moldando respostas celulares rápidas à lesão tecidual. A sinalização mediada por BDKRB2 interage com a atividade do sistema calicreína–cinina e faz “cross-talk” com as vias das prostaglandinas e do sistema renina–angiotensina, influenciando a homeostase vascular e inflamatória. A atividade desregulada do receptor B2 tem sido associada a fenótipos cardiovasculares e inflamatórios, à sinalização da dor e a processos relacionados com edema, sustentando estudos mecanísticos em células endoteliais, músculo liso e modelos relevantes para o sistema imunitário.

bradykinin B2 R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BDKRB2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

bradykinin B2 R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BDKRB2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BDKRB2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de bradykinin B2 R. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BDKRB2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de bradykinin B2 R no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via bradykinin B2 R em células tumorais com expressão de BDKRB2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.