BPTF Double Nickaseプラスミド (h): sc-404092-NIC

BPTF（bromodomain PHD finger transcription factor）は、NURFクロマチンリモデリング複合体の中核サブユニットであり、ヒストン修飾の認識をATP依存的なヌクレオソームのスライディングに結び付けることで、クロマチンのアクセシビリティと転写プログラムを形成します。BPTFはPHDフィンガーとブロモドメインを介して、H3K4メチル化およびヒストンアセチル化からのシグナルを統合し、発生、系譜（ライン）決定、ならびに細胞周期進行を制御する遺伝子発現ネットワークを調節します。BPTF依存的なリモデリングはエンハンサー活性と転写因子の占有に影響を与え、エピジェネティック状態をRNAポリメラーゼIIによる転写と結び付けます。BPTFの発現や機能の破綻は、複数のがんおよび神経発達関連の文脈で観察されるクロマチン状態の変化や転写依存性の変容と関連づけられており、エピジェネティクスおよび転写生物学の研究標的としての有用性を支持します。

BPTF ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における BPTF 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、BPTF内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、BPTFの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、BPTFが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。