BPGM Double Nickaseプラスミド (h): sc-405810-NIC

ビスホスホグリセリン酸ムターゼ（BPGM）は赤血球系で高発現する酵素であり、ヘモグロビンの酸素親和性を調節する主要なアロステリックエフェクターである2,3-ビスホスホグリセリン酸（2,3-BPG）を合成・分解することで、ラポポート–ルーバリング経路（Rapoport–Lueberingシャント）を制御します。BPGMは2,3-BPGレベルを調整することにより、解糖系フラックスを酸素供給および赤血球の代謝恒常性と結び付け、成熟赤血球におけるエネルギーバランスやレドックス感受性のプロセスに影響を与えます。BPGM活性の変化は2,3-BPG量を攪乱し、酸素解離動態を変化させ得るため、BPGMは赤血球生理および低酸素適応の研究において重要な標的となります。この経路の遺伝学的または代謝的な調節異常は、酸素輸送や解糖系リモデリングが影響を受ける遺伝性赤血球疾患や貧血関連表現型の文脈で検討されています。

BPGM ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における BPGM 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、BPGM内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、BPGMの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、BPGMが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。