Bob 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400771

概要

POU2AF1（Bob 1／OBF-1）はB細胞に特異的に発現する転写共活性化因子で、OCT1／POU2F1およびOCT2／POU2F2に結合し、免疫グロブリン遺伝子の転写と、より広範なB細胞の遺伝子発現プログラムを増強します。オクタマーモチーフ上のエンハンサー活性を、B細胞の活性化や生存を規定するシグナル入力と統合することで、胚中心反応、クラススイッチ組換え、形質細胞への分化を支えます。POU2AF1の発現異常およびそれに関連する転写回路の破綻は、リンパ腫や白血病を含むB細胞性悪性腫瘍や、体液性免疫応答の変化に結びつく免疫表現型で報告されています。そのためBob 1は、B細胞のアイデンティティ、抗原刺激に依存した成熟、ならびに免疫エフェクター遺伝子の転写制御を担う経路の研究で一般的に解析されています。

Bob 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPOU2AF1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、POU2AF1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、POU2AF1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Bob 1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Bob 1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、POU2AF1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Bob 1の機能に不可欠なPOU2AF1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、POU2AF1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Bob 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびBob 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、POU2AF1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Bob 1 HDRプラスミド（h）および Bob 1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPOU2AF1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPOU2AF1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。