BNP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421946

Übersicht

Nppb kodiert das B‑Typ‑natriuretische Peptid (BNP), ein sezerniertes kardiales Hormon, dessen Expression durch myokardiale Dehnung und neurohormonelle Signale hochreguliert wird. Nach der Prozessierung aus proBNP signalisiert BNP über Natriuretische‑Peptid‑Rezeptoren, stimuliert die Guanylatcyclase‑Aktivität, erhöht cGMP und moduliert dadurch Gefäßtonus, Natriurese und Programme des kardialen Remodellings. In der Maus wird die Nppb‑Expression häufig als molekularer Readout für hämodynamischen Stress und Kardiomyozytenhypertrophie verwendet und mit Signalwegen verknüpft, die Fibrose, den Umsatz der extrazellulären Matrix und inflammatorische Signalübertragung steuern. Eine dysregulierte BNP/NP‑Signalgebung ist relevant für Studien zu kardialer Druckbelastung, remodellierungsassoziierten Phänotypen bei Herzinsuffizienz sowie der kardiorenalen Homöostase.

Das BNP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Nppb-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Nppb-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Nppb nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die BNP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Nppb-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der BNP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Nppb-Exone abzielen, die für die BNP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Nppb-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom BNP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom BNP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Nppb-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das BNP HDR-Plasmid (m) und BNP HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Nppb-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Nppb-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.