BNP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402447-ACT

O NPPB humano codifica o peptídeo natriurético do tipo B (BNP), um hormônio de origem cardíaca produzido principalmente por cardiomiócitos ventriculares em resposta ao aumento do estresse na parede. Após o processamento do pró-hormônio, o BNP sinaliza por meio do receptor A de peptídeos natriuréticos (NPR1/GC-A) para elevar o cGMP e ativar vias dependentes de PKG que modulam a vasodilatação, a natriurese e programas gênicos antifibróticos. A transcrição de NPPB integra sinais biomecânicos e neuro-humorais, incluindo sinalização dependente de cálcio e cascatas de MAPK, conectando a carga hemodinâmica a alterações coordenadas no remodelamento do miocárdio. A expressão desregulada de NPPB/BNP é amplamente utilizada como indicador molecular de estresse cardíaco e é estudada em contextos como hipertrofia, fibrose e biologia da insuficiência cardíaca.

BNP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NPPB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BNP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NPPB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NPPB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BNP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NPPB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BNP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BNP em células tumorais com expressão de NPPB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.