BNIP-3 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-419356-ACT

マウスBnip3は、低酸素誘導性のBCL2ファミリーBH3-onlyメンバーであるBNIP-3をコードしており、主としてミトコンドリア外膜に局在してミトコンドリア恒常性を制御する。BNIP-3は、HIF-1シグナル伝達、オートファゴソーム－リソソーム系のフラックス、ならびにアポトーシス制御因子とのクロストークに関連する経路を介して、ミトコンドリア膜電位の低下、マイトファジー、そしてプログラム細胞死を促進する。代謝ストレス下の組織では、BNIP-3は生存と損傷ミトコンドリアの除去とのバランスを調整し、活性酸素種（ROS）の産生や生体エネルギー適応の形成に関与する。BNIP-3活性の異常は、虚血性障害、神経変性、腫瘍微小環境における低酸素などの文脈で関与が示唆されており、マウスモデルにおけるストレス適応とミトコンドリア品質管理を研究するうえで有用な結節点となる。

BNIP-3 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Bnip3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BNIP-3 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Bnip3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBnip3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BNIP-3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBnip3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBNIP-3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBnip3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBNIP-3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。