Plasmide Double Nickase (h) BMPR-II: sc-400895-NIC

BMPR2 code le récepteur de type II des protéines morphogénétiques osseuses (BMPR‑II), un récepteur kinase sérine/thréonine qui se lie aux ligands BMP et transmet le signal via des complexes avec des récepteurs de type I afin de réguler la phosphorylation canonique de SMAD1/5/8 ainsi que des voies non canoniques telles que p38 MAPK. Ce réseau de signalisation coordonne des programmes transcriptionnels contrôlant l’homéostasie endothéliale et des cellules musculaires lisses, la différenciation cellulaire et le remodelage de la matrice extracellulaire. Une activité BMPR‑II dérégulée est fortement associée à un dysfonctionnement vasculaire et à des phénotypes de remodelage anormaux, et les variants de BMPR2 sont largement étudiés dans le contexte de l’hypertension artérielle pulmonaire héréditaire et idiopathique. BMPR2 est également étudié en biologie du développement et dans la signalisation liée à la fibrose en raison de sa position centrale dans les interactions entre les voies BMP et TGF‑β.

BMPR-II Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BMPR2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BMPR2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BMPR2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BMPR2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.