BMP-8A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406589-ACT

O gene humano **BMP8A** codifica a proteína morfogenética óssea 8A (BMP-8A), um ligante secretado da superfamília TGF-β que sinaliza por meio de receptores BMP tipo I/II com atividade quinase de serina/treonina para ativar programas transcricionais dependentes de SMAD1/5/8. A BMP-8A contribui para o padrão de desenvolvimento, a diferenciação tecidual e a regulação do remodelamento da matriz extracelular, com crosstalk a jusante com vias MAPK que podem influenciar a proliferação e o comprometimento de linhagem. Em modelos celulares, a sinalização associada a BMP8A é comumente estudada em contextos de biologia osteogênica e reprodutiva, nos quais alterações na atividade da via BMP estão ligadas a morfogênese desregulada e a fenótipos semelhantes à fibrose. A perturbação de componentes da sinalização BMP, incluindo a disponibilidade do ligante e a dinâmica receptor–SMAD, é relevante para estudos mecanísticos de distúrbios do desenvolvimento e de mudanças na decisão de destino celular impulsionadas por vias de sinalização.

BMP-8A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BMP8A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BMP-8A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BMP8A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BMP8A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BMP-8A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BMP8A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BMP-8A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BMP-8A em células tumorais com expressão de BMP8A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.