BMP-7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419346-ACT

A proteína morfogenética óssea 7 (Bmp7) codifica a BMP-7, um ligante secretado da superfamília TGF-β que sinaliza por meio de receptores de serina/treonina quinase dos tipos I/II para ativar SMAD1/5/8 e programas transcricionais a jusante. Em células de camundongo, a BMP-7 regula o padrão embrionário, o desenvolvimento esquelético, a morfogênese renal e a diferenciação epitelial, com crosstalk dependente do contexto com vias de MAPK. A BMP-7 também influencia o remodelamento da matriz extracelular e a transição epitélio–mesênquima, processos frequentemente estudados em biologia da fibrose e em modelos de reparo tecidual. A sinalização desregulada de BMP-7 tem sido associada a anomalias do desenvolvimento e a alterações na homeostase de órgãos, tornando-a um nó útil para investigar vias em sistemas relevantes para doenças.

BMP-7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Bmp7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BMP-7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Bmp7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Bmp7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BMP-7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Bmp7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BMP-7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BMP-7 em células tumorais com expressão de Bmp7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.