BMP-5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404234-ACT

BMP5 codifica a proteína morfogenética óssea 5 (BMP-5), um ligante secretado da superfamília TGF-β que sinaliza por meio de receptores de BMP dos tipos I e II para ativar programas transcricionais dependentes de SMAD1/5/8. A BMP-5 contribui para o padrão embrionário e para a homeostase tecidual pós-natal, com papéis estabelecidos na osteogênese, na condrogênese e na remodelação da matriz extracelular. Em tipos celulares responsivos, a interação (crosstalk) da BMP-5 com MAPK e outras vias dependentes do contexto ajuda a moldar a diferenciação e os gradientes de morfógeno. Alterações na expressão ou na sinalização de BMP5 são estudadas em distúrbios do desenvolvimento e em fenótipos musculoesqueléticos, e também são investigadas quanto ao seu impacto na biologia do microambiente tumoral e na regulação de estados de linhagem em modelos de câncer.

BMP-5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BMP5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BMP-5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BMP5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BMP5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BMP-5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BMP5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BMP-5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BMP-5 em células tumorais com expressão de BMP5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.