BMP-4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400543-ACT

BMP4 codifica a proteína morfogenética óssea 4 (BMP-4), um ligante secretado da superfamília TGF-β que sinaliza por meio de receptores quinase de serina/treonina dos tipos I/II para ativar programas transcricionais dependentes de SMAD1/5/8. A BMP-4 é um morfógeno essencial que regula o padrão embrionário, a especificação do mesoderma, a diferenciação osteogênica e condrogênica e as decisões de destino de células-tronco, com crosstalk adicional com vias MAPK dependendo do contexto celular. Em tecidos adultos, a BMP4 contribui para o remodelamento da matriz extracelular, sinais angiogênicos e dinâmicas epitélio–mesênquima. A desregulação da sinalização de BMP4 tem sido implicada em anomalias do desenvolvimento e é frequentemente estudada em biologia do câncer, fibrose e modelos de doença vascular como reguladora do estado de diferenciação e da sinalização do microambiente.

BMP-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BMP4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BMP-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BMP4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BMP4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BMP-4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BMP4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BMP-4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BMP-4 em células tumorais com expressão de BMP4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.