Bmi-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417606-ACT

BMI1 codifica a proteína do grupo Polycomb Bmi-1, um componente central do complexo repressivo Polycomb 1 (PRC1), que mantém o silenciamento epigenético de genes por meio da compactação da cromatina e da ubiquitinação de H2A. A Bmi-1 regula programas transcricionais que controlam a autorrenovação, o comprometimento de linhagem e a progressão do ciclo celular, incluindo a repressão do locus CDKN2A/INK4A–ARF e a modulação de checkpoints de senescência. Por meio dessas funções, BMI1 influencia as respostas a danos no DNA, a tolerância ao estresse oxidativo e fenótipos do tipo “stem” em diversos contextos celulares. A atividade desregulada de BMI1 tem sido amplamente associada a estados transcricionais oncogênicos e a alterações de diferenciação em múltiplos modelos relevantes para doenças, tornando-o um alvo frequente em pesquisas de epigenética e biologia do câncer.

Bmi-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BMI1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Bmi-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BMI1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BMI1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Bmi-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BMI1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Bmi-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Bmi-1 em células tumorais com expressão de BMI1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.