BMCP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422996-ACT

Slc25a14 codifica a proteína transportadora mitocondrial BMCP1, um transportador da membrana interna implicado na regulação da bioenergética mitocondrial por meio da modulação do vazamento de prótons e da eficiência de acoplamento. Ao influenciar o potencial de membrana, o equilíbrio de espécies reativas de oxigênio (ROS) e o desempenho da fosforilação oxidativa, a BMCP1 conecta o metabolismo mitocondrial às respostas celulares ao estresse e às vias de detecção de energia. Alterações na atividade da BMCP1 têm sido associadas a mudanças na homeostase metabólica, na suscetibilidade ao estresse oxidativo e à disfunção mitocondrial específica de tecidos, tornando o Slc25a14 um alvo relevante para o estudo de mecanismos associados ao metabolismo e à neurodegeneração em modelos murinos.

BMCP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Slc25a14 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BMCP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Slc25a14 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Slc25a14, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BMCP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Slc25a14 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BMCP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BMCP1 em células tumorais com expressão de Slc25a14 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.