Particules Lentivirales d'Activation (h) BMAL1: sc-400808-LAC

ARNTL (BMAL1) code un facteur de transcription central de type hélice–boucle–hélice basique (bHLH) contenant un domaine PAS, qui forme un hétérodimère avec CLOCK/NPAS2 pour piloter l’expression génique circadienne. Par sa liaison aux boîtes E, BMAL1 régule des boucles de rétroaction transcriptionnelle–traductionnelle impliquant les protéines PER et CRY et coordonne des programmes oscillatoires liés au métabolisme, au contrôle du cycle cellulaire, aux réponses aux dommages de l’ADN et à l’homéostasie rédox. Cette machinerie circadienne s’interface avec les voies de signalisation endocrines et immunitaires, contribuant à une synchronisation spécifique aux tissus des réponses inflammatoires et des flux métaboliques. Une dérégulation d’ARNTL a été associée à des troubles du sommeil et des rythmes circadiens et a été impliquée, dans des études expérimentales et génétiques, dans des phénotypes cardiométaboliques, neuropsychiatriques et liés au cancer.

Les particules d'activation lentivirales BMAL1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ARNTL dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales BMAL1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ARNTL, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de BMAL1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ARNTL ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.