BLVRB Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405988-ACT

A BLVRB (biliverdina redutase B) humana é uma oxidorredutase citosólica dependente de NAD(P)H que catalisa a redução da biliverdina IXβ a bilirrubina, contribuindo para o catabolismo do heme e para a homeostase redox celular. Ao modular os níveis de biliverdina e bilirrubina, a BLVRB influencia a capacidade antioxidante, o tamponamento de espécies reativas de oxigênio (ROS) e vias de sinalização a jusante responsivas ao estresse, ligadas à adaptação metabólica e à inflamação. A atividade da BLVRB também está associada à fisiologia eritroide e ao turnover da hemoglobina, conectando-a a vias que regulam o manejo do ferro e o controle de danos oxidativos. A desregulação do metabolismo do heme e o desequilíbrio redox estão implicados em diversos distúrbios hematológicos e metabólicos, tornando a BLVRB um ponto útil para estudos mecanísticos de respostas ao estresse oxidativo e do metabolismo de pigmentos.

BLVRB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BLVRB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BLVRB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BLVRB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BLVRB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BLVRB. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BLVRB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BLVRB no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BLVRB em células tumorais com expressão de BLVRB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.