BLOS2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406776

Visão geral

BLOC1S2 codifica a BLOS2, uma subunidade central do complexo 1 de biogênese de organelas relacionadas a lisossomos (BLOC-1), que coordena o tráfego endossomal e a triagem de cargas. Por meio das interações do BLOC-1 com complexos de proteínas adaptadoras e com a maquinaria de transporte do citoesqueleto, a BLOS2 contribui para o direcionamento de proteínas de membrana a endossomos, lisossomos e organelas relacionadas a lisossomos, influenciando a maturação de vesículas e a homeostase celular. A disrupção de componentes do BLOC-1 tem sido associada a alterações no crescimento de neuritos, na dinâmica de vesículas sinápticas e a defeitos em vias de pigmentação que dependem de organelas especializadas, como os melanossomos. Assim, o BLOC1S2 é estudado no contexto de distúrbios do transporte intracelular e da neurobiologia, nos quais a perturbação da via endolisossomal pode afetar a sinalização e a proteostase.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO BLOS2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene BLOC1S2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do BLOC1S2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do BLOC1S2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína BLOS2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de BLOC1S2 para a investigação da sinalização de BLOS2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) BLOC1S2 críticos para a função BLOS2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos BLOC1S2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo BLOS2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo BLOS2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus BLOC1S2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo BLOS2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR BLOS2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia BLOC1S2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo BLOC1S2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.