BLCAM Double Nickaseプラスミド (h): sc-401451-NIC

ヒトCD22（BLCAMとも呼ばれる）は、B細胞に特異的に発現するシアル酸結合性の免疫グロブリン様レクチン（Siglec）であり、B細胞抗原受容体（BCR）の抑制性共受容体として機能する。BCRが刺激されるとCD22はリン酸化され、SHP-1ホスファターゼをリクルートすることで下流のキナーゼシグナルを抑制し、カルシウムフラックス、MAPK活性化、ならびにB細胞の活性化と免疫寛容を規定するPI3K関連経路を調整する。シグナル伝達の閾値を制御し免疫恒常性を促進する役割を通じて、CD22は抗原応答性の調節、生存シグナルの制御、末梢B細胞の自己寛容の維持に寄与する。CD22のシグナル伝達や発現の破綻は、自己免疫やB細胞由来腫瘍の生物学に関わる異常なB細胞活性化状態と関連づけられており、BCR経路制御の機序解析における標的として有用であることが示されている。

CD22 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CD22 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CD22内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CD22の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CD22が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。