betaKlotho Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401614-ACT

O KLB humano codifica a betaKlotho, um correceptor transmembranar de passagem única que confere especificidade de ligante à sinalização endócrina de FGF, destacando-se por facilitar a sinalização FGF19/FGFR4 em hepatócitos e a sinalização FGF21/FGFR1c em tecidos metabólicos. Por meio dessas vias, a betaKlotho regula a homeostase dos ácidos biliares, o metabolismo de glicose e lipídios e o balanço energético ao modular o eixo MAPK/ERK a jusante e programas transcricionais relacionados. Alterações na expressão ou na função de KLB têm sido associadas à desregulação metabólica, incluindo obesidade, resistência à insulina e processos ligados à doença hepática gordurosa não alcoólica, e podem influenciar o crescimento hepático e respostas ao estresse. Como KLB é um determinante-chave da responsividade aos FGFs endócrinos, ele é frequentemente estudado em modelos de detecção de nutrientes, sinalização em hepatócitos e comunicação cruzada entre tecido adiposo e fígado.

betaKlotho O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KLB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

betaKlotho O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KLB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KLB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de betaKlotho. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KLB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de betaKlotho no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via betaKlotho em células tumorais com expressão de KLB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.