beta Actin Double Nickaseプラスミド (h): sc-400000-NIC

ACTBはヒトのβアクチンをコードしており、βアクチンは高度に保存された細胞骨格タンパク質で、重合してマイクロフィラメントを形成し、細胞形態、機械的強度、細胞内輸送を支えます。βアクチンの動態は、細胞接着、遊走、細胞質分裂、エンドサイトーシスを制御する経路においてアクチン結合タンパク質と協調して働き、RhoファミリーGTPaseによるアクチン再構築の制御などのシグナル伝達ネットワークとも連動します。さらに、アクチンの構築はクロマチン構成やメカノトランスダクションにも影響するため、ACTBは細胞恒常性の参照指標として頻用される一方で、運動性や細胞ストレス応答の研究における機能的ハブとしても位置づけられます。アクチン制御およびACTB関連の細胞骨格プロセスの攪乱は、浸潤能の変化、発生異常、細胞骨格病変など、疾患に関連する多様な表現型に関与すると考えられています。

beta Actin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ACTB 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ACTB内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ACTBの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ACTBが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。