beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419239-ACT

Atp1b3 codifica a subunidade β3 da Na⁺/K⁺-ATPase, uma ATPase do tipo P heteromérica que mantém gradientes transmembranares de Na⁺ e K⁺ essenciais para o potencial de membrana em repouso, o equilíbrio osmótico e o transporte ativo secundário. Ao sustentar a homeostase iônica, a ATP1B3 influencia processos como a regulação do volume celular, o transporte epitelial e a excitabilidade, e pode modular redes de sinalização acopladas ao potencial de membrana e à atividade de quinases dependentes de íons. A subunidade β também contribui para a montagem, o tráfego e a estabilidade na membrana do complexo da bomba, moldando assim a demanda energética celular por meio do transporte iônico dependente de ATP. A disfunção da Na⁺/K⁺-ATPase é relevante em modelos de disfunção neurológica, na fisiologia cardiovascular e renal e em fenótipos associados à inflamação, tornando Atp1b3 um alvo útil para estudos mecanísticos em sistemas murinos.

beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Atp1b3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Atp1b3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Atp1b3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Atp1b3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 em células tumorais com expressão de Atp1b3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.