BDP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422508

概要

Ptpn18 は、受容体型チロシンキナーゼ（RTK）シグナル伝達および、細胞増殖・接着・運動性を規定する下流のリン酸化依存的経路の制御に関与するタンパク質チロシンホスファターゼをコードします。マウス細胞では、PTPN18 は EGFR/ErbB ファミリーのシグナル伝達の調節や、シグナルの持続時間と空間的配置に影響を与えるタンパク質トラフィッキング過程の制御に関連付けられています。特定基質の脱リン酸化を介して、PTPN18 は MAPK および PI3K 関連の出力に影響し、細胞骨格ダイナミクスや細胞ストレス応答に作用するシグナルを統合し得ます。ホスファターゼ活性の異常や RTK シグナルの変調は、がん原性シグナルプログラムや炎症性表現型と広く関連しているため、Ptpn18 は疾患関連モデルにおける機序解明研究の標的として有用です。

BDP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPtpn18遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ptpn18内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ptpn18のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、BDP1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、BDP1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ptpn18欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• BDP1の機能に不可欠なPtpn18エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ptpn18ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• BDP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびBDP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ptpn18遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  BDP1 HDRプラスミド（m）および BDP1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPtpn18ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPtpn18標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。