BDNF Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400029-ACT

O fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF) é uma neurotrofina secretada que se liga a TrkB (NTRK2) e p75NTR para regular a sobrevivência neuronal, a diferenciação, a plasticidade sináptica e a remodelação de circuitos dependente de atividade. A sinalização de BDNF aciona as vias MAPK/ERK, PI3K/AKT e PLCγ para coordenar programas de expressão gênica subjacentes à aprendizagem, à memória e ao equilíbrio excitatório/inibitório. Alterações na expressão ou no processamento de BDNF têm sido associadas à biologia de doenças neuropsiquiátricas e neurodegenerativas, incluindo suscetibilidade a transtornos do humor, prejuízo cognitivo e responsividade ao estresse. Além do sistema nervoso, o BDNF contribui para a comunicação cruzada neuroimune e metabólica, tornando-o relevante para estudos de disfunção neuronal associada à inflamação.

BDNF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BDNF sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BDNF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BDNF em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BDNF, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BDNF. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BDNF nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BDNF no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BDNF em células tumorais com expressão de BDNF silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.