BCNP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404731-ACT

FAM129C codifica a BCNP1, uma proteína intracelular envolvida em programas de sinalização e transcrição que moldam o estado das células imunes e respostas adaptativas ao stress. A expressão de FAM129C é enriquecida em linhagens hematopoéticas e tem sido associada à modulação da sinalização inflamatória e de vias acionadas por receptores que influenciam a sobrevivência e a diferenciação celular. Alterações na expressão de BCNP1 foram relatadas em condições associadas ao sistema imunitário e em múltiplos contextos de cancro, sustentando a sua utilidade como ferramenta molecular para estudar a plasticidade de linhagem e as interações tumor–imunidade. Assim, FAM129C constitui um nó útil para investigar o redirecionamento de vias na imunidade, na proliferação e na biologia do stress celular em sistemas modelo humanos.

BCNP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FAM129C sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BCNP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FAM129C em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FAM129C, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BCNP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FAM129C nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BCNP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BCNP1 em células tumorais com expressão de FAM129C silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.