BCMO1 CRISPR Activationプラスミド (h2): sc-405374-ACT-2

ヒトBCO1はβ-カロテン15,15′-モノオキシゲナーゼ1（BCMO1）をコードしており、これは細胞質に局在する非ヘム鉄依存性ジオキシゲナーゼとして、食事由来β-カロテンを中央で開裂して全トランス-レチナールを生成する。この全トランス-レチナールはレチノイン酸および視覚色素（クロモフォア）の重要な前駆体である。BCMO1はレチノイドの利用可能性を制御することで、上皮分化、脂質代謝、酸化ストレス応答を調節するRAR/RXR依存的な転写プログラムを介したレチノイドシグナル伝達に影響を及ぼす。BCO1の遺伝的多型や発現変動は、プロビタミンAの変換効率における個体差と関連し、ビタミンA栄養状態、代謝表現型、ならびに網膜／眼の生物学にまたがる形質との関連も報告されている。さらに、BCO1/BCMO1の遺伝子編集ツールは、関連するヒト細胞モデルにおいて、カロテノイド代謝、レチノイド恒常性、そして下流の転写ネットワークの機序解明研究を可能にし、食事—遺伝子相互作用の解析や、脂質ハンドリングおよび抗酸化防御との経路間クロストークの検討にも有用である。

BCMO1 CRISPR活性化プラスミド（h2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BCO1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BCMO1 CRISPR 活性化プラスミド (h2) は、ヒト細胞株における BCO1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBCO1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BCMO1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBCO1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBCMO1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBCO1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBCMO1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。