Bcl-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400025-ACT

BCL2 codifica a Bcl-2, uma proteína integral da membrana externa da mitocôndria que suprime a apoptose ao restringir a permeabilização da membrana externa mitocondrial e limitar a liberação de citocromo c. Ao sequestrar proteínas pró-apoptóticas do tipo BH3-only e antagonizar a ativação de BAX/BAK, a Bcl-2 atua como um nó-chave na via intrínseca da apoptose e molda as respostas celulares ao estresse, à retirada de fatores de crescimento e ao dano ao DNA. A atividade de BCL2 intersecciona-se com redes de sinalização de sobrevivência, incluindo as vias PI3K–AKT e MAPK, e influencia a dinâmica mitocondrial e a homeostase redox. A expressão desregulada de BCL2 é frequentemente associada a um comprometimento do “priming” apoptótico no câncer e contribui para a sobrevivência aberrante de populações de células malignas e imunes, tornando-se amplamente relevante para estudos de oncogênese, resposta ao tratamento e homeostase imune.

Bcl-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BCL2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Bcl-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BCL2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BCL2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Bcl-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BCL2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Bcl-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Bcl-2 em células tumorais com expressão de BCL2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.