Bcl-11b Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403460-ACT

BCL11B codifica o fator de transcrição Bcl-11b, uma proteína C2H2 do tipo dedo de zinco que atua como um regulador definidor de linhagem no desenvolvimento de células T e na diferenciação de timócitos. Ele integra sinais de vias-chave do desenvolvimento, incluindo programas transcricionais mediados por Notch e pelo TCR, para controlar o estado da cromatina e coordenar redes de expressão gênica que governam proliferação, sobrevivência e comprometimento de linhagem. A atividade desregulada de BCL11B tem sido associada a alterações na identidade de células imunes e a controle transcricional aberrante em contextos de doenças hematológicas, tornando-o um nó relevante para o estudo de circuitos regulatórios gênicos. Em modelos celulares humanos, a modulação dos níveis de Bcl-11b é comumente usada para investigar diferenciação, lógica de enhancers e cooperação entre fatores de transcrição.

Bcl-11b O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BCL11B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Bcl-11b O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BCL11B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BCL11B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Bcl-11b. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BCL11B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Bcl-11b no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Bcl-11b em células tumorais com expressão de BCL11B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.