BBS9 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404329-ACT

BBS9 codifica um componente central do complexo BBSome, que coordena o tráfego de proteínas de membrana para e a partir do cílio primário, sustentando a composição da membrana ciliar e a fidelidade da transdução de sinais. Ao interagir com outras proteínas BBS, o BBS9 contribui para processos associados ao transporte intraflagelar que moldam a ciliogênese e regulam a localização de receptores de vias como Hedgehog e outras redes de sinalização dependentes de cílios. A disfunção de BBS9 está ligada à biologia das ciliopatias, nas quais alterações no tráfego ciliar podem afetar o padrão de desenvolvimento, a sinalização sensorial e a homeostase energética. Essas características tornam o BBS9 um alvo útil para investigar mecanismos dependentes de cílios, a dinâmica do transporte de receptores e as relações genótipo–fenótipo em modelos celulares humanos.

BBS9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BBS9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BBS9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BBS9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BBS9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BBS9. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BBS9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BBS9 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BBS9 em células tumorais com expressão de BBS9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.