Barx2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403458-ACT

O BARX2 humano codifica a Barx2, um fator de transcrição homeobox que regula decisões de destino celular e programas de diferenciação durante o desenvolvimento e a remodelação tecidual. Por meio da ligação ao DNA dependente de sequência, a Barx2 ajuda a coordenar redes transcricionais associadas a interações epitélio–mesênquima, organização do citoesqueleto e regulação da matriz extracelular, influenciando processos como migração e especificação de linhagem. A atividade de BARX2 se integra a eixos mais amplos de sinalização do desenvolvimento que moldam a morfogênese e a plasticidade celular, o que o torna relevante para estudos de diferenciação, regeneração e controle transcricional desregulado. Alterações na expressão de BARX2 foram relatadas em contextos de arquitetura tecidual aberrante e biologia de doenças proliferativas, sustentando sua utilidade como um nó mecanístico para a investigação de vias transcricionais.

Barx2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BARX2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Barx2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BARX2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BARX2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Barx2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BARX2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Barx2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Barx2 em células tumorais com expressão de BARX2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.