Plásmido CRISPR de Activación (h) BAMBI: sc-403701-ACT

BAMBI (inhibidor unido a la membrana de BMP y activina) codifica un seudorreceptor transmembrana que se asemeja a los receptores tipo I de la familia TGF-β, pero carece del dominio quinasa intracelular, por lo que actúa como un modulador dependiente del contexto de la señalización de BMP y TGF-β/Activina. Al influir en la dinámica de fosforilación de SMAD y en la formación de complejos receptores, BAMBI puede ajustar los programas transcripcionales aguas abajo que gobiernan la plasticidad epitelio-mesenquimal, la diferenciación y las respuestas inflamatorias. La expresión desregulada de BAMBI se ha vinculado con una salida alterada de la vía de TGF-β en contextos asociados a fibrosis e inflamación, y se investiga con frecuencia en estudios sobre el microambiente tumoral y la señalización metastásica. Como nodo regulador en la membrana, BAMBI es relevante para diseccionar el “cross-talk” entre programas asociados a BMP, Wnt/β-catenina y NF-κB en modelos celulares humanos.

BAMBI El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BAMBI sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BAMBI El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BAMBI en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BAMBI, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BAMBI. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BAMBI y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BAMBI en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BAMBI en células tumorales con expresión de BAMBI silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.