BAI-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-430764-ACT

O Adgrb1 de camundongo codifica o inibidor de angiogênese 1 específico do cérebro (BAI-1), um GPCR de adesão enriquecido no sistema nervoso e em microambientes associados à vasculatura. O BAI-1 participa de interações célula–célula e célula–matriz, promove o reconhecimento de células apoptóticas por meio da fagocitose dependente de fosfatidilserina e modula a remodelação do citoesqueleto via sinalização de GTPases da família Rho. O processamento proteolítico pode liberar fragmentos antiangiogênicos, conectando o BAI-1 à regulação do crescimento vascular e à homeostase tecidual. Alterações na expressão ou na função do BAI-1 têm sido implicadas em vias relevantes para neuroinflamação, organização sináptica, biologia do microambiente tumoral e angiogênese aberrante, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos de fenótipos do SNC e vasculares.

BAI-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Adgrb1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BAI-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Adgrb1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Adgrb1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BAI-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Adgrb1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BAI-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BAI-1 em células tumorais com expressão de Adgrb1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.