BAF170 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402023-ACT

SMARCC2 codifica a BAF170, uma subunidade central de arcabouço do complexo de remodelamento de cromatina SWI/SNF (BAF) dependente de ATP, que modula o posicionamento de nucleossomos para regular programas transcricionais. A BAF170 contribui para a acessibilidade de enhancers e promotores, influenciando a especificação de linhagens, o controle do ciclo celular e a transcrição responsiva a danos no DNA por meio de um remodelamento coordenado da cromatina. Como parte da rede mais ampla BAF/PBAF, a SMARCC2 interage com vias que regem a diferenciação, a organização da cromatina e a estabilidade epigenética. A desregulação de subunidades do SWI/SNF é recorrente em doenças humanas, e alterações em SMARCC2 têm sido associadas a mudanças na expressão de genes do desenvolvimento e a vulnerabilidades em contextos oncogênicos dependentes de cromatina.

BAF170 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SMARCC2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BAF170 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SMARCC2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SMARCC2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BAF170. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SMARCC2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BAF170 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BAF170 em células tumorais com expressão de SMARCC2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.