BACH1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419283-ACT

Bach1 codifica o fator de transcrição BTB and CNC homology 1 (BACH1), um regulador responsivo ao heme que modula programas de estresse oxidativo ao se associar a pequenas proteínas Maf e se ligar a elementos de reconhecimento Maf em promotores-alvo. Em células de camundongo, o BACH1 atua como um nó central na homeostase redox, influenciando a expressão de genes citoprotetores como Hmox1 e coordenando respostas a espécies reativas de oxigênio, ao metabolismo de ferro/heme e à sinalização inflamatória. Por esses mecanismos, o BACH1 se conecta a vias que controlam a função mitocondrial, decisões de destino celular e a remodelação transcricional induzida por estresse. A atividade desregulada de BACH1 tem sido associada a respostas alteradas a danos oxidativos e vem sendo estudada em contextos relevantes para inflamação, neurodegeneração e biologia tumoral, como regulador da adaptação celular ao estresse.

BACH1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Bach1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BACH1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Bach1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Bach1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BACH1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Bach1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BACH1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BACH1 em células tumorais com expressão de Bach1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.