B7-H4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416865-ACT

VTCN1 codifica a proteína de checkpoint imunológico B7-H4 (também conhecida como VTCN1), um ligante da família B7 que modula a ativação de células T e a produção de citocinas para conter as respostas imunes. A B7-H4 costuma apresentar baixa expressão na maioria dos tecidos normais, mas pode ser induzida em contextos celulares específicos e é frequentemente associada a programas imunorregulatórios em compartimentos epiteliais e mieloides. Sua expressão se integra a redes de sinalização inflamatória e de apresentação de antígenos que influenciam a função dos linfócitos e a homeostase imune dos tecidos. A desregulação de VTCN1/B7-H4 tem sido associada à evasão imune tumoral e a padrões alterados de infiltração imune, tornando-a relevante para estudos mecanísticos em imunologia do câncer e inflamação.

B7-H4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de VTCN1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

B7-H4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus VTCN1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição VTCN1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de B7-H4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus VTCN1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de B7-H4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via B7-H4 em células tumorais com expressão de VTCN1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.