B7-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419575-ACT

O gene Cd86 de camundongo codifica a proteína coestimuladora B7-2, da superfamília das imunoglobulinas, um ligante de superfície em células apresentadoras de antígeno que se liga a CD28 e CTLA-4 para modular a ativação, a proliferação e a produção de citocinas por células T. A B7-2 participa da formação da sinapse imune e se integra à sinalização do receptor de antígeno para moldar respostas imunes adaptativas, incluindo a polarização de subtipos Th e mecanismos de tolerância. Alterações na expressão de CD86 são comumente usadas como indicador de ativação de células dendríticas e macrófagos e estão implicadas na biologia de doenças inflamatórias e autoimunes, bem como na imunologia tumoral, por meio da modulação da sinalização de checkpoints.

B7-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cd86 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

B7-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cd86 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cd86, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de B7-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cd86 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de B7-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via B7-2 em células tumorais com expressão de Cd86 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.