B7-2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-418032-ACT

ヒトCD86（B7-2）はI型膜貫通型糖タンパク質で、主として抗原提示細胞に発現し、CD28およびCTLA-4との結合を介してT細胞に必須の共刺激シグナルを提供します。B7-2はT細胞受容体（TCR）シグナルと統合されることで、リンパ球の活性化、サイトカイン産生、分化を調節し、獲得免疫応答や末梢免疫寛容の形成に関与します。CD86は免疫シナプス形成にも参加し、NF-κBおよびPI3K/AKTに連動する転写プログラムに寄与して、自然免疫・獲得免疫の双方における活性化状態を制御します。CD86発現の制御異常は、自己免疫、慢性炎症、移植拒絶反応の病態、ならびに腫瘍の免疫回避に関与するとされており、免疫学および微小環境に焦点を当てた研究における一般的な標的となっています。

B7-2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CD86の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

B7-2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CD86 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCD86転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性B7-2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCD86遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるB7-2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCD86発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるB7-2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。