B23/Nucleophosmin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421943

概要

マウスの Npm1 は、B23／ヌクレオフォスミンをコードしている。これは多機能な核小体リン酸化タンパク質で、核小体・核・細胞質の間をシャトル移動し、リボソーム生合成、rRNA のプロセシング、核小体構造の維持を協調的に制御する。ヌクレオフォスミンは、p53／ARF シグナル伝達、DNA 損傷応答、クロマチン関連プロセスなどの主要な制御ネットワークとの相互作用を介して、細胞周期制御やストレス応答にも関与する。中心体複製、ゲノム安定性、核—細胞質間輸送における役割は、Npm1 の機能を増殖制御および細胞恒常性の維持と結び付けている。ヌクレオフォスミンの活性や局在の破綻はがん生物学や造血制御の分野で広く研究されており、Npm1 は腫瘍性ストレスや核小体機能不全の機構解析における一般的な標的となっている。

B23/Nucleophosmin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNpm1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Npm1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Npm1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、B23/Nucleophosminタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、B23/Nucleophosminシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Npm1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• B23/Nucleophosminの機能に不可欠なNpm1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Npm1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• B23/Nucleophosmin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびB23/Nucleophosmin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Npm1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  B23/Nucleophosmin HDRプラスミド（m）および B23/Nucleophosmin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNpm1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNpm1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。