B-Myb Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h2): sc-401318-LAC-2

O MYBL2 humano codifica o fator de transcrição B-Myb, um regulador da família Myb que coordena a progressão do ciclo celular ao controlar a expressão de genes necessários para a transição G1/S, a replicação do DNA e a entrada em mitose; o B-Myb atua no eixo regulatório DREAM–MMB e coopera com a sinalização mediada por E2F e por ciclinas/CDKs para modular programas transcricionais associados à cromatina e a estabilidade do genoma; a atividade desregulada de MYBL2 é frequentemente ligada a fenótipos proliferativos e tem sido associada a assinaturas transcricionais oncogênicas em múltiplos contextos tumorais, tornando-o um nó molecular útil para estudar o controle do ciclo celular e a reprogramação transcricional; a edição gênica de MYBL2 permite a investigação mecanística de checkpoints de proliferação, respostas ao estresse replicativo e o mapeamento de dependências de fatores de transcrição em modelos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais B-Myb (h2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de MYBL2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais B-Myb (h2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição MYBL2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de B-Myb. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo MYBL2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.